La facility di zebrafish comprende:
• Due laboratori di ricerca e laboratori per lo svolgimento di esercitazioni didattiche per Corso di Laurea in Biotecnologie dotati dei principali strumenti per svolgere esperimenti di biochimica, biologia molecolare e biologia applicata.
• Un laboratorio di live imaging dotato di sofisticati e moderni strumenti per l’acquisizione di immagini in vivo: un microscopio a fluorescenza (Axiozoom) e un 3D Lightsheet (Zeiss)
• Un laboratorio di micromanipolazione e microiniezione dotato di due microiniettori collegati ad un sistema ad alta pressione per iniezione di acidi nucleici (morfolino, sgRNA, RNA messaggero, plasmidi) e cellule tumorali.
• Un laboratorio di colture cellulari, dotato di cappa a flusso laminare ed incubatore a CO2. Tale laboratorio è dedicato anche allo studio del comportamento di zebrafish mediante strumentazione Danio Vision chamber (Noldus) equipaggiato con fotocamera in grado di registrare il comportamento di zebrafish in presenza di stimoli diversi (quali luce e rumore) e software Danio Vision e Danio Scope per l’analisi dei risultati.
• Una stanza con un sistema di acquari automatizzato in grado di ospitare, nelle migliori condizioni di allevamento, circa 2000 pesci per una capacità totale di 1500 litri di acqua. Gli animali sono stabulati in vasche, con ricircolo continuo d’acqua, della capacità di 3.5 litri ciascuna. Negli acquari sono ospitate numerose linee transgeniche e mutanti (CRISPR/cas9) di zebrafish.
Tecniche in atto presso la Facility
Nella facility di zebrafish vengono utilizzate le seguenti tecnologie innovative:
Tol2 system per la generazione di animali transgenici
CRISPR/Cas9 per la generazione di animali knock-out
Microiniezione di cellule tumorali (xenografts)
In vivo live imaging per l’analisi di espressione genica durante lo sviluppo embrionale e durante lo sviluppo tumorale
Analisi del comportamento di zebrafish
Studi di tossicità durante lo sviluppo embrionale (FET Test)
Analisi del processo di respirazione cellulare e mitocondriale (Seahorse)